Bradford法蛋白质定量检测试剂盒

描述

【产品名称】

通用名称：Bradford法蛋白质定量检测试剂盒

【包装规格】（1ml，50ml）

【产品介绍】

布拉德福德法（考马斯亮蓝法）是测定蛋白质最灵敏，最快速的方法之一。 当Bradford染色液(考马斯亮蓝G250)与蛋白质在酸性条件下，溶液颜色由深棕色变为蓝色，最大吸收波长456nm至595nm，吸光度值与蛋白质含量在一定浓度范围内有较好的线性关系，通过测定吸光度值大小和对比标准蛋白质吸光度值，确定蛋白质浓度，实现蛋白质浓度的快速测定，稳定性和高灵敏度。

【产品特点】

1.快速，10-20个样品只需10分钟完成。

2.稳定，加样混匀5分钟后可测定，1小时吸光度变化小于10%。

3.最小体积为10-20ul，最小测量蛋白50ng。

4.材料如表面活性剂、甘油，但溶液记忆蛋白氨基酸组成、各种蛋白质的组合和染料效率可能有差异。

5.经济实用：均在MPP中测量，可大大节省样品和试剂的消耗。

【主要组成部分】

产品组成部分

BSA（2mg/ml）           1ml

考马斯G-250染料         50ml

【储存温度】
布拉德福德染色液2-8℃保存，BSA蛋白标准-20℃。 有效期一年。

【操作步骤】

1. 按要求从冰箱中取适量Bradford染色液；酶标仪预热20分钟。

2. 按要求取适量标准品，加去离子水稀释至100ug/ml(原液2mg/ml)，混匀。

注：原则上蛋白质样品应与标准品在同一溶液中稀释。 但为了简单起见，你可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准。 蛋白标准也可稀释-20℃长期保存。 以下步骤默认采用去离子水，稀释剂可根据条件选择。

3. 标准曲线绘制。 取一酶标板，按下表数据加入试剂：(本方案线性范围为2.5-50ug/ml。

注：每个梯度最好做6个相同浓度的蛋白样品，减少人为误差对标准曲线绘制的影响。

4. 混合后，室温放置5-6分钟。

5. 用酶标仪测定（595-620）nm处的光吸收值，不含BSA的光吸收值作为空白对照。

6. 以蛋白质含量(附表g)为横坐标，以光吸收为纵坐标绘制标准曲线。

7. 样品测量：用去离子水将蛋白样品稀释至适当浓度。 取10升样品，加入200升l布拉德福德染料溶液和10升去离子水。

8. 根据测定的吸收值，在标准曲线上可以找到样品的蛋白质含量。

【实验数据】

（1）标准曲线的测定：R2=99.71%=99.5%
（2）精密度试验：平均RSD=0.09%<2%
（3）稳定性试验：平均RSD=0.92%<3%
（4）重复性试验：平均RSD=0.60%<3%
（5）平均RSD为2.7936%<5%

【常见问题】

1. 当吸光度大于0.8a时，请稀释样品后再测定。

2. 用Bradford法测定蛋白质浓度时，样品浓度在2.5-50ug/ml范围内呈良好的线性关系。 您还可以根据需要调整标准蛋白稀释浓度范围，绘制标准曲线，以获得更准确的结果。

3.最好使用塑料或玻璃小杯。 如果使用石英色色盘，重复清洗后立即用少量95%乙醇清洗掉染料。 塑料着色剂不应长期浸泡在乙醇或丙酮中。

4. 比色顺序从蛋白质浓度低的试管开始，中间不用清洗比色皿，以免影响结果。

5. 疏水蛋白或粘蛋白可能与染料沉淀，加入1MNaOH即可消除。

6.如果已知样品的一般蛋白质浓度，则可以使用类似的3管制作标准曲线。

7. 由于各种蛋白质中精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，Bradford法在不同蛋白质的测定存在较大偏差。

8.布拉德福德染料可能有刺激性或腐蚀性。 搬运时戴乳胶手套。 如皮肤，眼睛，或用大量清水或生理盐水冲洗。

9. 布拉德福德染料溶液中的考马斯亮蓝很容易聚集成一组。 每次使用前，请将瓶子倒置6至8次，并将瓶头垂直保持水平圆圈动作。

10. 低温会降低Bradford染色液的灵敏度。 因此，Bradford染色液在使用前应恢复到室温。

11. 在标准曲线的制备中，如果吸量不准确或加样枪不准确，则会降低标准曲线的相关系数。 可根据倍率梯度稀释的需要配制产品，也可使用精度高的加样枪。

12. 由于当Bradford中的蛋白质浓度增加到某一点时，颜色的反应不会按比例增加，因此得到的标准曲线可以近似地看作是在一定范围内的一条直线。 每次应根据实际测量的标准曲线计算相对准确的蛋白质浓度。

13. 需要一个酶标仪，最佳检测波长为595nm。 也可以在570-610nm之间测量，但会降低一些灵敏度。 需要96个孔。 如果没有酶标仪，可以使用常规分光光度计。 当使用分光光度计测定蛋白质浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

14.与其他一些蛋白质浓度测定(包括Lowry法)不同，Bradford法不影响大多数样品中蛋白质的浓度。 样品中巯基乙醇浓度可高达1M，二聚醇浓度可高达5M。 然而，它受洗涤剂浓度略高的影响。 为了保证SDS低于0.125%，Tritonx-100低于0.125%，吐温20低于0.06%，可以通过超纯水稀释，透析/脱盐，再溶解ACETONE/TCA沉淀蛋白来消除干扰物质的影响。 含有洗涤剂的样品建议使用Mbchem™BCA蛋白浓度测定试剂盒(Mbchem™M3020)。

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