LipoGene™ 2000 PLus Transfection Reagent

描述

产品名称：LipoGene™ 2000 PLus Transfection Reagent
产品货号：L7003
产品规格：0.75 mL，1.5 mL
储存条件
4℃保存，一年有效（避免冷冻）。
产品介绍
LipoGene™ 2000 PLus Transfection Reagent 是一种非常高效的新型转染试剂，达到了国际最主流转染试剂的转染效果。适用于把质粒、siRNA 或其它形式的核酸包括 DNA、RNA、寡核苷酸转染到真核细胞中。
LipoGene™ 2000 PLus Transfection Reagent 对于常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、无明显的细胞毒性，并且对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。
LipoGene™ 2000 PLus Transfection Reagent 转染试剂的使用方法和常用的 Lipofectamine®2000 Reagent 完全一致，转染效率也和 Lipofectamine® 2000 Reagent 相当甚至略高。
LipoGene™ 2000 PLus Transfection Reagent 转染试剂不仅适用于质粒、siRNA 等单一成分的细胞转染，也适合多个质粒或者质粒与 siRNA 等的组合转染。
LipoGene™ 2000 PLus Transfection Reagent 转染试剂转染过表达质粒后，通常 24-48 h 后达到较高的蛋白表达水平，并且很多情况下蛋白表达量在转染后 48 h 显著高于转染后 24 h；转染siRNA 通常 3-5 天后对于目的基因的下调水平会比较理想。
LipoGene™ 2000 PLus Transfection Reagent 转染试剂转染细胞时，基本不受细胞培养液中血清影响，即可以在血清存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最佳的转染效果，推荐转染时使用不含抗生素培养液。转染后不必去除转染液，或者改变或添加培养基，但转染 4-6 h 后可去除转染液。
使用方法
1. DNA 转染
下列步骤适用于 24 孔板培养的哺乳动物细胞，至于其他培养材料，请参考转染规模调整，所有数量和体积均是按孔计算。大部分细胞系所使用的 DNA（μg）与 LipoGene™2000PLusTransfection Reagent（μL）的比值为 1: 2 到 1: 3，转染高密度细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒性。优化转染是必需的（见优化质粒 DNA 转染）。
A. 贴壁细胞：转染前一天每孔 0.5-2×10 5 个细胞接种于 500μL 不含抗生素的培养基中，在转染时细胞可长至 70-90%融合。
悬浮细胞：在配制转染液前每孔 4-8×10 5 个细胞接种于500 μL 不含抗生素的培养基中。
B. 转染液制备，每孔细胞用量如下：
a. 用 50 μL Opti-MEM 低血清培养基（或者其他无血清培基） 稀释质粒 DNA，轻轻混匀。
b. 使用前轻轻摇匀 LipoGene™ 2000 PLus TransfectionReagent，然后取适量 LipoGene™2000 PLus TransfectionReagent 在 50 μL Opti-MEM培养基中稀释，室温孵育 5 min。
注意：请在 25 min 内进行下一步操作。
c. 将前两步所稀释的 DNA 和 LipoGene™ 2000 PLusTransfection Reagent 混合 （使总体积为 100 μL），轻轻混匀，室温放置 20 min（溶液可出现浊）。
注意：转染复合物常温下可在 6 h内保持稳定。
C. 在每孔细胞中加入 100 μL 转染液，轻轻摇匀。
D. 37℃培养 18-48 h 后检测基因表达，转染 4-6 h 后可更换培养基。
E. 对于稳定转染，在转染 24 h 后以 1: 10 稀释接种于新鲜培养基中，第二天可加入选择培养基。
优化 DNA 转染
可通过改变细胞密度、质粒DNA密度和LipoGene™2000PLus Transfection Reagent 浓度以优化转染。要保证细胞融合在 90%以上，DNA (μg): LipoGene™2000 PLus TransfectionReagent (μL)可在 1:0.5 到 1:5 之间进行调整。
2. RNAi 或 或 siRNA 转染
下列步骤适用于 24 孔板培养的哺乳动物细胞，至于其他培养材料，请参考转染规模调整，所有数量和体积均是按每孔计算。
A. 转染前一日，将细胞接种于 500 μL 不含抗生素的培养基中，使其在转染时长至 30-50%融合。
B. 转染液制备，每孔细胞用量如下：
a. 用 50 μL Opti-MEM 低血清培养基（或者其他无血清基）稀释20 pmoL siRNA（转染时siRNA终浓度为33 nM），轻轻混匀。
b. 使用前轻轻摇匀 LipoGene™ 2000 PLus TransfectionReagent，然后取 1 μL LipoGene™ 2000 PLus TransfectionReagent在50 μL Opti-ME I培养基中稀释，室温孵育5 min。
注意：请在 25 min 内进行下一步操作。
c. 将前两步所稀释的 RNA 和 LipoGene™ 2000 PLusTransfection Reagent 混合（使总体积为 100 μL），轻轻混匀， 室温放置 20 min（溶液可出现浑浊）。
C. 在每孔细胞中加入 100 μL 转染液，轻轻摇匀。37 ℃培养 24-96 h后检测基因表达，转染 4-6 h后可更换培养基。
siRNA 转染优化
可调整 siRNA 与 LipoGene™ 2000 PLus TransfectionReagent 的用量以优化转染，在 24 孔板，siRNA 可在 10-50 pmoL 之间调整，LipoGene™ 2000 PLus Transfection Reagent可在 0.5-1.5 μL 之间调整，在增加细胞密度时也应优化转染剂量。
转染规模调整
不同培养材料转染液、细胞和培养基的用量按照培养材料面积换算。在 96 孔板细胞高通量自动分析系统，推荐每孔使用 50 μL 转染液。注意：在 96 孔板，可将细胞直接接种于转染液中以实现快速转染，直接在培养板中配制转染液 100μL，直接将细胞加入培养板中，其密度为上述方法的 2倍，细胞在转染液中可正常贴壁。

1. 使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。
2. 转染前细胞必须处于良好的生长状态。
3. 需自备不含抗生素的无血清培养液或 Opti-MEM®培养
液或普通的 DMEM 培养液。
4. LipoGene™ 2000 PLus Transfection Reagent 转染试剂不能
vortex 或离心，宜缓慢晃动混匀。
5. LipoGene™ 2000 PLus Transfection Reagent 转染试剂使用
后请立即盖好盖子，避免长时间暴露在空气中，影响转染效
率。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。