Qubit X-Green II dsDNA Quantitation Kit

描述

产品货号: Q2034
产品规格: 100T、500T
产品内容

储存条件

本产品 4℃避光保存，推荐条件下至少可以储存 6 个月。对于长期储存，1× Buffer 和 dsDNA 标准品可以储存在≤-20ºC。

产品参数

Ex/Em: 480/520 nm（结合 dsDNA）

产品介绍

X-Green II是荧光检测dsDNA并进行定量的一种产品，这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术：cDNA 文库的构建、亚克隆的DNA片段纯化及应用，比如进行DNA定量、产物扩增和引物的进一步检测。常规的DNA含量的检测方法是在260nm处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大，并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰，无法区分DNA和RNA，而且这种方法不灵敏（5 μg/mL dsDNA溶液A 260 =0.1）。X-Green II定量检测方法简单、方便，成为生物制品残留DNA检测的标准。

X-Green II只有与dsDNA结合后才发出荧光，并且所发荧光强度与DNA浓度成正比。X-Green II dsDNAQuantitstion Kit可以检测出10pg/uL-100ng/uL范围内的dsDNA，且线性关系较好(R 2 >0.99)。

该试剂盒可用于所有的Qubit仪器。

实验步骤

试剂制备

1.X-Green II dsDNA定量试剂是以1 mL的浓缩液形式保存在有机溶剂中。实验时，配制操作溶液：1× X-Green II试剂，将组分A用组分B按1:200的比例稀释，可在20 mL 组分B中加入100 μL 组分A。由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。X-Green II试剂见光易降解，因此要注意避光保存。

溶液最好在配制好的数小时内使用，以保证最佳的实验结果。

实验方法
1. 准备足够量的 0.5mL 的可用于 Qubit 仪器的 Ep 管。
注：Qubit 仪器适用 Ep 管为透明的薄壁 Ep 管，Ep 管的侧面不要做标记，以免影响荧光值得采集。
2. 对于标准品来说，每管中加入190 µL 配置好的1×X-Green II 工作液。
3. 向上述工作液中分别加入10 µL 组分C和组分D，涡旋震荡2-3s，注意震荡过程中不要产生气泡，此过程用来制定标准曲线。
注: 确保加入的组分C和组分D是10 µL，最后终体积为200µL。
4. 添加一定量体积的1× X-Green II工作液到要测的样品中，确保最终体积为200 µL。
注：一般添加样品的体积为1-20µL，相应的添加1× X-GreenII工作液的体积为199-180 µL。
5. 室温孵育2 min。
6. 读取数据，生成标准曲线，并确定未知样品中DNA的浓度。

1. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2. X-Green II工作液最好现配现用，以保证最佳结果。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。