Super Atlas ECL （特超敏/ 稳定化学发光检测试剂盒）

描述

产品名称：Super Atlas ECL （ 特 超 敏/ 稳定 化学发光检测试剂盒）
产品货号：S-6028（100 mL）
产品内容及规格：100mL（A 液 50 mL+ B 液 50 mL ）
储存 条件
4℃密封避光保存一年以上，短期可放置室温。
产品描述
Super Atlas ECL 最高灵敏度底物是一款具有超高灵敏度的增强型化学发光（ECL）底物，可通过辣根过氧化物酶（HRP）实现低飞克级（fg）的免疫印迹检测。Super Atlas ECL具有更强的稳定性，用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。由于采用了独特的发光底物系统，Super Atlas ECL 超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂。
Super Atlas ECL 特点：
1. 具有极高灵敏度和高信噪比，使用适当的一抗和二抗时，可在硝化纤维膜或 PVDF 膜上检测丰度为低飞克（中zeptomole（10^21）)级的蛋白条带；
2. 长信号持续时间：优化条件下，可检测的光信号输出长达 8-12 小时；
3. 明亮信号—通过胶片或成像系统进行曝光，易于捕获图像；
4. 价格经济：配方经过优化，可适用于浓度极低的抗体检测
• 1 ng-0.2 μg/mL一抗（或1 mg/mL的稀释1: 5,000-1: 100,000）
• 2 ng-10 ng/mL 二抗（或 1 mg/mL 的稀释 1: 100,000-1:500,000）
使用方法
1. 执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤，0.01-0.2μg/mL 一抗孵育 1 h 或过夜，洗膜后，2-10 ng/mL 二抗孵育30-60 min。
2. Western Blot 最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液：分别取等体积的溶液 A 和 B，放入干净容器中混合。
注：建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
3. 用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液（0.1 mL 发光工作液/cm 膜）中，与发光工作液充分接触。室温孵育 3-5 min。
4. 取膜，弃发光工作液，用吸水纸略吸去过多的液体。将膜放在两片保鲜膜中间，随后进行压片检测或成像仪检测。
5. 压片检测：将膜固定于片夹内，蛋白带面向上。暗室内压片 1 min，立即显影定影，根据结果再调整压片时间。或直接分别压片 30 s、1、3、5 min，然后一起显影定影观察结果。
6. 成像仪检测：将膜放置到成像仪内，参考仪器说明书进行检测。
注意事项
1. 步骤 1～4 可在日光灯下操作，但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
2. 长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系，曝光不足则条带模糊。
3. 发光工作液孵育约 3 min 后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 光胶片感光，因而弱带可曝光 1-10 h。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 发光和曝光。
4. 由于特超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1:1000～1:4000，二抗 1:2000～1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。
5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。
6. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
7. NaN 3 能抑制HRP 活性，回收第二抗体应避免使用NaN 3 ，如必需使用勿超过 0.01%。