Super GelRed ® 核酸凝胶染料 10,000

描述

Super GelRed ® 核酸凝胶染料 10,000 ×
产品货号：S2001 ( in water ) S2002 ( in DMSO )
产品规格：0.5 mL
储存条件：避光，室温保存
产品介绍
Super GelRed ®是一种高灵敏、无毒超安全和超稳定的荧光核酸凝胶染色试剂（在工作浓度中）。它可替代溴化乙锭 (EtBr，EB），具有远高于 EB 的灵敏度，同时不需要脱色。由于 Super GelRedr 和 EB 有相同的光谱特性，因此用它替代 EB 时不需要更换成像系统。
使用方法
1 ．胶染法（用法同 EB ）
（1）制胶时加入 Super GelRed ® 核酸染料
（例如：每 50 mL 琼脂糖溶液中加入 5 μL Super GelRed ®10,000× 储液，以此比例类推）。
（2）按照常规方法进行电泳。
注意事项：
此方法染色染料用量相对较少，500 μL 染料大约可以做 100 块 50 mL 的胶。
由于 Super GelRed ® 具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将 Super GelRed ® 储液加到含有琼脂糖粉末的电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。Super GelRed ® 兼容所有常用的电泳缓冲溶液。
2 ．泡染法
（1）按照常规方法进行电泳。
（2）用 H 2 O 将 Super GelRed ® 10,000× 储液稀释约 3,300倍到 0.1 M NaCl 中，制成 3× 染色液。（例如将 15 μL Super GelRed ® 10,000× 储液，5 mL 1 M NaCl加到45 mL H 2 O 中）。
（3）将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中，缓慢加入足量的 3× 染色液浸没凝胶，室温振荡染色 30 min左右，即可获得理想的效果。最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含 3.5～10％丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于 30 min 到 1 h，并随丙烯酰胺含量增加而延长。
强烈推荐：为了缩短泡染时间，染色液可以预先加热至 70℃左右，然后放入凝胶，孵育 10min 即可获得理想的效果。具体步骤见下页使用说明。
注意事项：
用泡染法染色时，染料用量较多，单次使用的染色液可重复使用 3 次左右。3× Super GelRed ® 染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。
注：1. 如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。
2. 如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、延长凝胶时间以保证边缘清晰、改进上样技巧或选择泡染法染色。
Super GelRed ® EB

图一. Super GelRed ® 、EB 胶染法电泳效果对比
（1% Agar 凝胶在 1×TBE 缓冲液中电泳，1kb DNA ladder 上样量分别为：200ng, 100ng, 50ng, 25ng，使用 302nm激发的紫外凝胶成像仪拍照。）

一、实验目的
核酸的琼脂糖凝胶电泳实验，对核酸（DNA 或 RNA）进行分离、鉴定和纯化等分析。
二、主要试剂
1. 琼脂糖（如 US Everbright A2015）
2. 1×TBE 电泳缓冲液
3. 0.1 M 的 NaCl 水溶液
4. DNA Marker: 如 US Everbright 1kb DNA ladder (DL2031)
5. 10000× Super GelRed ® in water/DMSO（S2001/2002）
三、实验方案
1. 根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉（如 1%的凝胶，即 1 g 琼脂糖加入 100 mL 1× TBE）。
2. 加入一定量的 1× TBE 电泳缓冲液（总液体量不宜超过锥形瓶的 50%容量）
注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须一致。
3. 锥形瓶在微波炉中加热，溶化琼脂糖。此操作重复 2-3次，直至琼脂糖完全溶化，形成均一、透明溶液。
4.根据实验需要，采用胶染法或者泡染法，两种方法选择一种即可：
1) 胶染法（用法同 EB）：琼脂糖溶液加入 10000× Super GelRed ® 核酸染料。每 50 mL 胶中加入 5 μL Super GelRed ®核酸染料，并充分混匀，将凝胶溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子，在室温下使胶凝固（大约 30 min~1 h）。
（由于 Super GelRed ® 具有出色的热稳定性，可将试剂直接加入高温的凝胶溶液中，无需等待凝胶溶液冷却后再加入。也可采用将 Super GelRed ® 试剂预先与含有琼脂糖粉末的TBE 溶液混合，加热制成）。
2) 泡染法：直接将不含有 Super GelRed ® 染料的琼脂糖溶
液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子，在室温下使
胶凝固（大约 30 min~1 h）。
5. 将做好的凝胶放置于电泳槽中，上样。
6. 电泳：在 1× TBE 的电泳缓冲液中，100-120 V 电泳 45-90
min（电泳时间视具体情况而定）。
7. 1) 胶染法：直接图像采集，通过标准的透视器（302 nm）
观察染色凝胶，拍照、保存。
2) 泡染法：用 0.1 M 的 NaCl 水溶液按照 3300﹕1 的比例稀释 Super GelRed ® 浓缩液，混匀，制成 3× Super GelRed ®染色溶液，将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，缓慢加入足量的 3× 染色溶液浸没凝胶，室温轻轻振荡染色30 min 左右，具体染色时间因凝胶浓度和厚度而定。
强烈推荐：为了缩短泡染时间，染色液可以预先加热，然后放入凝胶，温育 10min 即可获得理想的效果。加热方式可采用水浴法或微波加热法，具体步骤如下：
a. 水浴加热法：将配制的 3× Super GelRed ® 染色液放入70~75℃的水浴锅中预热，然后将电泳凝胶小心放入上述预热的染色液中，在水浴锅中水浴加热 5~10min左右(泡染期间可以间隔轻摇几次，加速染料与核酸的结合)。
b. 微波加热法：将电泳结束后的凝胶放入配制的 3×Super GelRed ® 染色液中，放入微波炉中加热，先加热约 30s，取出泡染装置，摇床孵育 30s-1min，待染液温度下降后，再微波加热 10~15s，然后摇床孵育，重复上述步骤 4-5 次 (注意微波加热时间不可过长，防止琼脂糖凝胶溶化)。
8. 图像采集：通过标准的透视器（302 nm）观察染色凝胶，拍照、保存。（染色溶液可重复使用 2-3 次。如果不是立即再用的话，建议将用过的染色溶液 4 度保存。）
四、注意事项：
1. 鉴于 Super GelRed ® 的高灵敏性，建议减少 DNA 的上样量，推荐已知浓度样品的上样量为 50-200 ng/泳道（8 泳道的小胶孔），对于未知浓度的样品，尝试 1/3 或 1/5 的常用上样量。根据胶孔大小适当增加或降低上样量。
2. 使用胶染法时，经检测 Super GelRed ® 跟市面上的一些DNA Ladder 存在不匹配的现象，如 Takara、天根的 marker，条带分离效果不佳，因此我们推荐使用的 marker 品牌有 US Everbright、Promega、Vazyme。
3. 推荐用 1×TBE 缓冲液代替 TAE，因为含硼酸盐的试剂导电性更好。电泳时电压不宜过高，一般TBE不要超过120V，TAE 不要超过 100 V。
4. 染料无需低温冷藏，请于室温下储存，以避免沉淀，若发现沉淀，请将染料加热至 45-50℃，2 min，振荡溶解，不影响使用效果。
推荐：聚丙烯酰胺凝胶核酸电泳推荐使用我司 S2005 SuperPage GelRed ® 染料，效果更佳。